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研究婦潔顆粒的體外、體內(nèi)抗菌活性
摘要：目的研究觀察婦潔顆粒的體外、體內(nèi)抗菌活性。方法采用平皿二倍稀釋法測(cè)定了婦潔顆粒對(duì)臨床分離的64株臨床常見(jiàn)的革蘭氏陽(yáng)性及革蘭氏陰性菌的體外抗菌作用。選擇了金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、變形桿菌及乙型溶血性鏈球菌進(jìn)行了小鼠體內(nèi)細(xì)菌感染的保護(hù)實(shí)驗(yàn)。結(jié)果該藥體外對(duì)金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌及大腸桿菌的作用為最強(qiáng)，MIC50分別為0.25，2和1 g·L-1；體內(nèi)實(shí)驗(yàn)也顯示對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌及變形桿菌造成的體內(nèi)感染動(dòng)物有較好的保護(hù)作用。結(jié)論對(duì)臨床常見(jiàn)的革蘭氏陽(yáng)性及革蘭氏陰性菌均具有較強(qiáng)的殺滅或抑制作用。關(guān)鍵詞： 婦潔顆粒； 抑菌； 大腸桿菌； 金黃色葡萄球菌
陰道炎、宮頸炎是婦科多發(fā)病、常見(jiàn)病，大多數(shù)是由細(xì)菌等病原微生物引起，長(zhǎng)期炎癥，可發(fā)展為宮頸糜爛。婦潔顆粒為治療陰道炎、宮頸炎的中成藥，具有清熱解毒、活血消炎的功效。為了解抗菌譜及藥效，我們對(duì)婦潔顆粒進(jìn)行了抗菌實(shí)驗(yàn)研究。
1 材料
1.1 受試物 婦潔顆粒，深棕色膏劑，每克膏相當(dāng)于生藥3.029 g，由本所提供，批號(hào)020820；陽(yáng)性對(duì)照藥：婦樂(lè)沖劑：規(guī)格6 g/袋，山東泰安紅旗制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)020309。
1.2 菌種、動(dòng)物與試劑 實(shí)驗(yàn)菌株，本實(shí)驗(yàn)共選用7種細(xì)菌。包括金黃色葡萄球菌12株、表皮葡萄球菌10株、大腸桿菌14株、腸球菌10株、普通變形桿菌12株、乙型溶血性鏈球菌6株，共計(jì)64株。以上菌株均為山東大學(xué)齊魯醫(yī)院收集的臨床分離菌株。全部菌種均進(jìn)行常規(guī)方法鑒定；金黃色葡萄球菌ATCC25922、大腸埃希氏菌ATCC25923，均來(lái)源于中國(guó)藥品生物制品檢定所。以上述菌株作為試驗(yàn)中的質(zhì)控菌株，各菌分別稀釋至終濃度為105 cfu/ml備用。健康昆明種小鼠，體重18～22 g，由山東魯抗醫(yī)藥集團(tuán)提供，合格證號(hào)：魯動(dòng)質(zhì)字D20020921。營(yíng)養(yǎng)肉湯，衛(wèi)生部上海生物制品研究所生產(chǎn)，批號(hào)000101；MH瓊脂，上海市醫(yī)學(xué)化驗(yàn)所試劑廠生產(chǎn)，批號(hào)990601。
1.3 供試品的配制采用二倍稀釋法將婦潔顆粒及婦樂(lè)沖劑分別稀釋配制成終濃度分別為128，64，32，16，8，4，2，1，0.5，0.25 g/L的含藥瓊脂平皿培養(yǎng)基，乙型溶血性鏈球菌用含有10%脫纖維的兔血含藥血液瓊脂平皿培養(yǎng)基，冷藏備用。以上操作均在無(wú)菌條件下進(jìn)行。
2 方法
2.1 實(shí)驗(yàn)菌株與標(biāo)準(zhǔn)菌株的最小抑菌濃度（MIC）測(cè)定［1］ 將稀釋好的菌液用多點(diǎn)接種儀分別接種到上述各含不同濃度藥物的瓊脂平皿培養(yǎng)基的表面上，37℃培養(yǎng)18 h，無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)的平皿中所含藥物的最低濃度即為該藥物的最小抑菌濃度(MIC)。
2.2 對(duì)感染小鼠的體內(nèi)保護(hù)實(shí)驗(yàn)［2］ 實(shí)驗(yàn)菌液的制備：將金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、變形桿菌、乙型鏈球菌分別定量接種于適宜的MH肉湯或含10%羊血的MH肉湯中，放孵箱37℃增菌6 h，取此菌液0.1 ml轉(zhuǎn)種于10 ml MH肉湯或含10%羊血MH肉湯中，放孵箱37℃孵育18 h，該菌為原菌液，適當(dāng)稀釋后，用5%滅菌胃膜素配制成感染動(dòng)物所需濃度菌液，供實(shí)驗(yàn)用。
最小致死量（MLD）實(shí)驗(yàn)：將原菌液用5%胃膜素進(jìn)行遞次稀釋。選健康小鼠若干，雌雄各半，分別腹腔注射不同濃度的各菌液，進(jìn)行各菌株的最小致100%動(dòng)物死亡（MLD）測(cè)試，測(cè)得金黃色葡萄球菌MLD為5×108 cfu/ml，大腸桿菌MLD為5×109 cfu/ml，變形桿菌MLD為5×108 cfu/ml，乙型鏈球菌MLD為1×106 cfu/ml。
對(duì)感染小鼠的體內(nèi)保護(hù)實(shí)驗(yàn)：選健康昆明種小鼠18～22 g，雌雄各半，隨機(jī)分為5組，每組10只，同時(shí)設(shè)MLD和1/10 MLD各1組，分別給每只小鼠腹腔注射菌液0.5 ml MLD菌量，于感染后即刻，6，12，24，48，72 h給各組小鼠不同濃度的藥物，觀察并記錄感染后小鼠死亡數(shù)，連續(xù)觀察14 d，根據(jù)小鼠死亡數(shù)，按Bliss法計(jì)算半數(shù)有效劑量ED50值及95%的可信限。
3 結(jié)果
3.1 婦潔顆粒對(duì)64株細(xì)菌的MIC測(cè)定 婦潔顆粒對(duì)大多數(shù)試驗(yàn)菌種的MIC范圍均在0.25～32 g/L之間，MIC50多為0.25～8 g/L，對(duì)金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌及大腸桿菌的作用為最強(qiáng)，MIC50分別為0.25，2和1 g/L，對(duì)變形桿菌和腸球菌作用次之，MIC50均為4g/L，對(duì)乙型溶血性鏈球菌的作用較弱，MIC50為32 g/L。同時(shí)，婦潔顆粒對(duì)2株標(biāo)準(zhǔn)菌株也有較好的抑制作用，對(duì)ATCC25922，ATCC2592的MIC分別為2，1 g/L。綜合上述結(jié)果，婦潔顆粒對(duì)試驗(yàn)中大部分革蘭氏陽(yáng)性及革蘭氏陰性菌均具有較強(qiáng)的殺滅或抑制作用，抗菌譜較為廣泛。結(jié)果見(jiàn)表1。表1 婦潔顆粒對(duì)64株細(xì)菌的MIC測(cè)定
3.2 婦潔顆粒對(duì)感染小鼠的體內(nèi)保護(hù)實(shí)驗(yàn) 各組動(dòng)物感染上述4種細(xì)菌后30 min出現(xiàn)怠動(dòng)，繼而出現(xiàn)臥位，精神萎靡、呼吸急促，死亡多發(fā)生在48 h之內(nèi)。陽(yáng)性對(duì)照藥婦樂(lè)沖劑組動(dòng)物感染后也出現(xiàn)上述癥狀。隨著用藥劑量的增加，死亡時(shí)間延遲。婦潔顆粒對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌及變形桿菌造成的體內(nèi)感染有較好的保護(hù)作用，見(jiàn)表2。由于受藥物濃度的限制，乙型鏈球菌造成的小鼠體內(nèi)感染未做出存活率為100%的保護(hù)劑量。結(jié)果見(jiàn)表2。
4 討論
以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：婦潔顆粒對(duì)臨床常見(jiàn)大部分革蘭氏陽(yáng)性及革蘭氏陰性菌均具有較強(qiáng)的殺滅或抑制作用，抗菌譜較為廣泛。體內(nèi)保護(hù)實(shí)驗(yàn)表明，婦潔顆粒對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌及變形桿菌有較好的體內(nèi)保護(hù)作用。表2 婦潔顆粒對(duì)感染小鼠的體內(nèi)保護(hù)實(shí)驗(yàn)
臨床上引起陰道炎和宮頸炎的常見(jiàn)病原菌有金葡菌、大腸桿菌、變形桿菌等,婦潔顆粒在臨床上對(duì)陰道炎和宮頸炎有較好的治療作用,是與該藥對(duì)常見(jiàn)致病菌有較強(qiáng)的抑制作用和較廣泛的抗菌譜分不開(kāi)的。
【參考文獻(xiàn)】
［1］ 李影林.中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)全書(shū)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1996：1054.
［2］ 張均田.現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)方法［M］.北京：北京醫(yī)科
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