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蛋白酶體抑制劑MG132對PC12細(xì)胞的增殖抑制作用
作者：蔡同建，陳景元，李妍，季愛玲，杜可軍，駱文靜【關(guān)鍵詞】 蛋白酶體抑制劑；PC12細(xì)胞；帕金森病；細(xì)胞凋亡
【Abstract】 AIM: To investigate the effect of proteasome inhibitor MG132 on the proliferation and apoptosis of dopaminergic PC12 cells. METHODS: PC12 cells were treated with MG132 at different concentrations for 3 d. The effect of MG132 on the proliferation of PC12 cells was analyzed through MTT assay and the effect of MG132 on the apoptosis of PC12 cells was analyzed through Giemsa staining and flow cytometry. RESULTS: Treated for a same period （3 d）, the inhibitory effect of MG132 on PC12 cell proliferation enhanced with the increment of the concentration of MG132（0, 1, 2.5, 5, 10, 20 μmol/L）. The inhibitory rate exceeded 40% when the MG132 concentration was 2.5 μmol/L, and the 50% inhibiting concentration （IC50）was 3.78 μmol/L. MG132 also induced the apoptosis of PC12 cells obviously. The apoptosis index of the cells treated by MG132 at 2.5 μmol/L for 3 d was 24.7% examined by Giemsa staining and 25.6% by flow cytometry, that of the control cells was 1.3% and 0% respectively. CONCLUSION: MG132 can inhibit the proliferation of dopaminergic PC12 cells and lead to apoptosis. The disfunction of proteasome may do harm to the existence of dopaminergic cells.
【Keywords】 proteasome inhibitor; PC12 cells; Parkinson disease; apoptosis
【摘要】 目的： 了解蛋白酶體抑制劑MG132對多巴胺能細(xì)胞PC12增殖和凋亡的影響. 方法： 用不同濃度的MG132處理PC12細(xì)胞3 d，通過3（4，5二甲基噻唑2）2，5二苯基四氮唑溴鹽（MTT）微量比色法檢測MG132對PC12細(xì)胞增殖的影響，通過姬姆薩染色法和流式細(xì)胞術(shù)檢測MG132對PC12細(xì)胞凋亡的影響. 結(jié)果： 在作用時間相同（3 d）的條件下，隨著MG132濃度的增高（0， 1， 2.5， 5， 10， 20 μmol/L），對PC12細(xì)胞增殖的抑制作用逐漸增強(qiáng). 當(dāng)MG132濃度達(dá)到2.5 μmol/L時，對PC12細(xì)胞的抑制率超過40%, IC50＝3.78 μmol/L. 同時，MG132能夠明顯誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡： 姬姆薩染色顯示，濃度為2.5 μmol/L的MG132作用3 d，細(xì)胞凋亡率為24.7%，而對照為1.3%；流式細(xì)胞術(shù)分析結(jié)果表明，濃度為2.5 μmol/L的MG132作用3 d，細(xì)胞凋亡率為25.6%，而對照為0%. 結(jié)論： 蛋白酶體抑制劑MG132能夠抑制多巴胺能細(xì)胞PC12的增殖并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，蛋白酶體活性的喪失可能影響到多巴胺能細(xì)胞的生存.
【關(guān)鍵詞】 蛋白酶體抑制劑；PC12細(xì)胞；帕金森病；細(xì)胞凋亡
0引言
帕金森病（parkinsons disease, PD）是最常見的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病之一，嚴(yán)重危害患者身體健康和降低患者的生活質(zhì)量［1-2］. PD的病因和發(fā)病機(jī)制至今不夠明確. 越來越多的證據(jù)表明，多巴胺能神經(jīng)元內(nèi)蛋白質(zhì)的損傷和功能異常蛋白的蓄積在散發(fā)性PD的發(fā)病過程中起著重要的作用［3］. 蛋白酶體是一種多價復(fù)合酶，分布于細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核內(nèi)，是哺乳動物細(xì)胞中主要的中性蛋白水解酶，在泛素蛋白酶體通路（ubiquitinproteasome pathway, UPS）中起催化作用［4-5］. 本研究以多巴胺能細(xì)胞PC12為研究對象，觀察蛋白酶體抑制劑MG132對PC12細(xì)胞的增殖和凋亡的影響，以探討蛋白酶體活性異常在PD發(fā)病過程中的作用，為闡明PD的發(fā)病機(jī)理提供新的實驗依據(jù).
1材料和方法
1.1材料高分化型PC12細(xì)胞購于中國科學(xué)院上海細(xì)胞所；新生牛血清（奧地利PAA公司）；DMEM培養(yǎng)基干粉（美國Gibco公司）；MTT、MG132（美國Sigma公司）；6 孔培養(yǎng)板
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