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幾種水溶性維生素對小鼠腹腔巨噬細胞活性的作用
【關鍵詞】 水溶性維生素；MTT法；小鼠巨噬細胞
To study the activation of in vitro mice macrophages with various water soluble vitamins
【Abstract】 Objective To propose studying the effect of various water soluble vitamins ( VitB1,VitB6,VitB12 and VitC ) of in vitro mice macrophages activation. Methods The article took the modified method of MTT to explose the activation of in vitro mrice macrophages. Results VitB150μl (0.0025μg), VitB6 200μl (0.002μg), VitB12 200μl (0.002μg), VitC 200μl(0.08μg) all stimulated the effect of in vitro mice macrophages. Conclusion Various water soluble vitamins( VitB1,VitB6,VitB12 and VitC )which were able to stimulate the activation of in vitro mice macrophages under certain concentration.
【Key words】 water soluble vitamin; MTT method; mice macrophage
維生素是維持人體正常生理功能及細胞內各種能量代謝生化反應所必需的一類低分子量有機化合物。盡管機體對這類物質需求量相對很少，但是它們卻十分重要，是人體必不可少的微量物質，如果缺乏，可引起各種各樣的疾病。因此某些種類維生素對人體的免疫系統的免疫功能也起著重要作用，影響免疫系統的各種細胞功能。最近許多年，國內外營養免疫學者都在研究探討各種維生素對免疫系統的作用，企圖探明各種維生素對免疫細胞活化的增強或抑制，為提高機體免疫力，本文選用和人類基因組具有相當部分同源性小鼠，選用 體外實驗檢測維生素B1、B6、B12和維生素C對小鼠腹腔巨噬細胞活性作用的研究。 Mosmon(1983)［1］報道噻唑藍（MTT）比色法，經后人改良，使這種方法更加完善成熟，成為定量、重復性好、簡便易行檢測免疫細胞活性的好方法。我們采用此法，檢測小鼠腹腔巨噬細胞的活性，現將結果報告如下。
1 材料與方法
1．1 實驗動物和主要試劑及實驗儀器 ICR小鼠體重（20±2）g，雄性，由首都醫科大學實驗動物部提供。RPMI1640培養液為Hyclmone公司產品。噻唑藍（MTT）為Sigma公司產品，10%十二烷基磺酸鈉（SDS）為BRL公司產品，淋巴細胞分離液為TBD生物技術發展中心產品，液體石蠟油為北京旭東化工廠產品， VitB1 （5mg/ ml）、VitB6 （5mg/ ml）、VitB12 （0.5mg/ ml）均為天津金耀氨基酸有限公司產品， VitC（400mg/ ml）為北京雙鶴藥業有限公司產品，酶標儀為SLT公司產品（型號為A-5082）。
1.2 方法 （1）對小鼠腹腔注射（VitB1 、VitB6 、VitB12 和VitC，無菌液體石蠟油），取ICR小鼠40只分成4組，每組10只，分別為1組、2組、3組和4組。1組為VitB1實驗組，第1天對其中5只小鼠腹腔注射無菌生理鹽水 0.2ml/只，作為對照，另外5只小鼠腹腔注射VitB1 0.05ml/只作為實驗組。2組為VitB6 實驗組，第1天對其中5只小鼠腹腔注射無菌生理鹽水 0.2ml/只，作為對照，另外5只小鼠腹腔注射VitB6 0.2ml/只作為實驗組。3組為VitB12 實驗組，第1天對其中5只小鼠腹腔注射無菌生理鹽水 0.2ml/只，作為對照，另外5只小鼠腹腔注射VitB120.2ml /只作為實驗組。4組為VitC 實驗組，第1天對其中5只小鼠腹腔注射無菌生理鹽水 0.2ml /只，作為對照，另外5只小鼠腹腔注射VitC 0.2ml/只作為實驗組。以上4組小白鼠經腹腔注射生理鹽水和維生素，均于48h后再經腹腔注射無菌液體石蠟油0.1ml /只。48h后行頸椎脫臼處死。（2）巨噬細胞的制備：將處死的小白鼠行腹部皮膚消毒后，持鑷提起腹中部皮膚并剪開，暴露腹膜，避開血管剪開腹膜一小口。用毛細吸管取出腹腔液，并收集于試管中。作好標記后離心，棄上清，洗3次，立即進行臺盼藍染色，計算活細胞數。細胞數108/ ml。（3）噻唑藍比色法，將制備的小鼠巨噬細胞按組分管，每組實驗管（孔）3管（孔）對照管（孔）3管（孔）。37℃溫育2h后，每管加10%SDS（溶于雙蒸水），輕輕震蕩，待甲簪顆粒完全釋放后，再用酶標儀測OD570值。
2 結果
2.1 VitB1對小鼠腹腔巨噬細胞活性的作用 VitB1對小鼠腹腔巨噬細胞活性的作用，VitB150μl（0.0025μg）對小鼠腹腔巨噬細胞活性有增 強作用，P
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