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畢業(yè)論文題目
梓醇對D-半乳糖擬老化神經(jīng)元的作用研究
背景介紹:
隨著世界人口中老年人比例和絕對數(shù)量的不斷攀升，由衰老引起的人口老化相關(guān)疾病的發(fā)病率明顯升高，與衰老相關(guān)的疾病已成為科學家面臨的一項重要挑戰(zhàn)。由于這類疾病常伴有嚴重的認知障礙及精神異常癥狀，甚至癱瘓和感覺障礙[1]，嚴重危害著老年人的健康，同時也給家庭、社會帶來了沉重的負擔。因此探討腦衰老機制，研究有效的延緩衰老進程的藥物，防治老年疾病己成為當今社會和醫(yī)藥學界研究的重大課題。
在諸多老年性疾病中，神經(jīng)退行性疾病患病率逐年提高，已經(jīng)成為影響人們健康水平和生活質(zhì)量的重大社會問題。神經(jīng)退行性疾病是中樞系統(tǒng)神經(jīng)組織非正常退變引起的一類進行性功能缺陷與衰退疾病，如阿爾茨海默病（老年癡呆），帕金森病，肌萎縮側(cè)索硬化癥，亨廷頓氏舞蹈癥等[2-4]。其中，老年癡呆的患病率占老年人口的4.6%，其中半數(shù)為老年原發(fā)性退行性癡呆。流行病學調(diào)查也顯示，在65歲以上的人群中，老年原發(fā)性退行性癡呆的發(fā)病率達2.9%。該病具有復雜的病理生理過程，受基因調(diào)控和多種環(huán)境因素影響，是一類病因?qū)W和發(fā)病機制還不清楚的疾病。臨床上，對于這類疾病尚無有效控制病程進展的措施，患者最終將喪失生活能力甚至死亡。目前，我國人口老化速度居世界之首，老年人口已超過1億，因此尋求有效的預防和治療衰老疾病的藥物迫在眉睫。
我國中藥有著悠久的歷史，良好的治療效果，是中華民族傳統(tǒng)文化的燦爛瑰寶，在幾千年的實踐發(fā)展中，已形成了自己獨特的理論體系。特別是針對疑難病和慢性病，中醫(yī)藥更有它的獨到之處。中藥具有多靶點多效性特點，既可改善癥狀以治標，又可提高機體抗病能力以治本，而且副作用較少、藥源豐富。中醫(yī)在治療老年性癡呆與記憶減退的數(shù)千年臨床經(jīng)驗中積累了許多寶貴的知識。自2世紀8年代以來，由于化學藥品開發(fā)所存在的技術(shù)難度高、價格昂貴、毒副作用明顯和環(huán)境污染嚴重等實際問題，傳統(tǒng)中醫(yī)藥的研究受到了廣泛的關(guān)注。
地黃是常用的補益中藥，為玄參科植物地黃Rehmannia glutinosa Libsch的新鮮根莖或干燥塊根，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，被列為上品[5]。地黃在我國有1多年的藥用歷史，應(yīng)用十分廣泛，對免疫、血液、內(nèi)分泌、心腦血管、神經(jīng)系統(tǒng)及抗菌、抗炎等方面均有一定的作用[6]。單味地黃[7]和以地黃為主的復方在衰老及其相關(guān)疾病治療中的應(yīng)用歷史也十分久遠。現(xiàn)代藥理學實驗發(fā)現(xiàn)其主要的活性組分為環(huán)烯醚萜苷類和地黃糖類。
梓醇是地黃中含量最高的的環(huán)烯醚萜苷類，屬于環(huán)氧醚型單萜類化合物。目前本實驗室分別在細胞和動物水平上證明了梓醇具有神經(jīng)保護作用，可能是潛在的延緩衰老和治療神經(jīng)退行性疾病如老年癡呆、帕金森疾病的藥物。由于衰老是各種神經(jīng)退行性疾病發(fā)生的根本要素，研究梓醇的抗衰老作用對預防和治療該類疾病具有重要意義[8-9]。
實驗前期發(fā)現(xiàn)梓醇具有改善D-半乳糖致衰老模型小鼠記憶減退的功效，同時能提高腦組織抗氧化能力和能量代謝障礙，因此本研究利用D-半乳糖引起神經(jīng)元老化的模型進一步研究梓醇抗衰老的作用機制，為該藥的開發(fā)和臨床應(yīng)用奠定一定的基礎(chǔ)。
研究意義:
1、D-半乳糖致衰老神經(jīng)細胞模型鮮見報道，明確該模型作用機制有助于利用此模型進行抗衰老藥物的篩選和機理研究。
2、梓醇在衰老動物模型上的效果明顯，利用細胞模型的研究有助于闡明梓醇抗衰老作用的分子作用機制。
研究內(nèi)容:
采用小鼠腦神經(jīng)元細胞原代培養(yǎng)，以D-半乳糖誘導體外神經(jīng)元細胞衰老，并通過研究藥物梓醇的加入對神經(jīng)元細胞的作用，進行細胞形態(tài)學觀察、細胞活力、細胞凋亡等綜合指標的測定。
實驗過程中應(yīng)用細胞免疫組化染色和熒光染色技術(shù)、流式細胞儀、熒光顯微鏡、紫外分光光度計、熒光酶標儀等方法手段，研究梓醇在體外的神經(jīng)保護作用機制。
預期達到的成果和水平:梓醇對D-半乳糖引起的小鼠腦神經(jīng)元細胞衰老有保護作用.
因此本課題擬利用原代培養(yǎng)SD大鼠乳鼠腦皮層神經(jīng)細胞，從超微結(jié)構(gòu)、細胞周期分析及SA-β-半乳糖苷酶(Senescence associated β-galactosidase)化學染色等指標觀察D－半乳糖培養(yǎng)對神經(jīng)元擬老化反應(yīng)并從生化方面研究梓醇的抗老化作用。
研究重點難點:
1、掌握原代神經(jīng)元細胞的培養(yǎng)、免疫組織化學等實驗技術(shù)。
2、明確D-半乳糖致神經(jīng)元衰老的作用濃度和作用時間范圍。
3、初步研究D-半乳糖致神經(jīng)元衰老的作用機理。
4、明確梓醇對D-半乳糖致衰老神經(jīng)元的作用效果。
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