達坂鹽湖沉積土壤嗜鹽細菌的多樣性分析及鈉離子輸出相關基因的克
論文摘要: 嗜鹽菌由于具有廣泛的環境（略）系統發育多樣性、獨特的耐鹽機制和潛在應用價值,近年來受到科學界的廣泛關注.本研究以新疆達坂鹽湖沉積土壤為實驗材料,對新疆達坂鹽湖的嗜鹽細菌進行多樣性分析,并從中克隆獲得1個新的鈉離子輸出相關基因.主要研究結論如下: 以選擇性富集培養獲得的嗜鹽細菌基因組DNA為模板,擴增16S rRNA基因,在此（略）鹽細菌的16S rRNA基因文庫,隨機挑選文庫中的100個陽性克隆子進行群落結構多樣性分析.16S rRNA基因序列分析結果表明:100個克隆分屬于細菌域9個屬的27個種,其中芽（略）cillus)為優勢菌群(48%),喜鹽芽孢桿菌(Halobacillus) (14%)、嗜鹽單胞菌(Halomonas) (13%)為次優勢菌群.分析的陽性克隆子中（略）子與GenBank中已報道16S rRNA基因序列的相似性在88.80%到96.90%之間,可能代表新屬或新種.研究結果表明,新疆達坂鹽湖沉積土壤的富集培養物中存在種類較為豐富的嗜鹽細菌. 以大腸桿菌Na+/H+逆向轉運蛋白基因缺陷株Escheric（略）li KNabc為宿主,...
Halophiles living in high-salt environment, due to a wide diversity of environmental（omitted）n, phylogenetic diversity, uniqu（omitted）erance mechanisms and potential applica-tions in recent years widespread attention by the scientific community. In this study, Daban（omitted） in Xinjiang as materials deposited s（omitted）er to obtain directional halophilic microorganisms enriched total DNA as a template of the Daban salt（omitted）injiang diversity of halophilic bacteria, and a new sodium ion output ...
目錄:摘要 第4-5頁
Abstract 第5頁
目錄 第6-9頁
1 序言 第9-26頁
·極端微生物簡介 第9-11頁
·極端微生物的主要生物類群 第9-10頁
·嗜熱微生物和嗜冷微生物 第9頁
·嗜酸微生物和嗜堿微生物 第9-10頁
·嗜鹽微生物 第10頁
·嗜壓微生物 第10頁
·極端微生物的應用 第10-11頁
·嗜鹽菌的研究概況 第11-16頁
·嗜鹽菌的定義和分類 第11-12頁
·嗜鹽菌棲息的鹽域環境 第12頁
·嗜鹽古菌的研究歷史 第12頁
·中度嗜鹽菌的研究歷史 第12-13頁
·嗜鹽菌的研究熱點 第13-16頁
·嗜鹽菌的分類學 第13頁
·嗜鹽菌的系統發育多樣性 第13-14頁
·嗜鹽菌的應用 第14-16頁
·嗜鹽菌的生理學 第16頁
·嗜鹽微生物的鹽適應機制 第16-23頁
·通過提高胞質緩沖力來適應高鹽環境 第17頁
·次級鈉泵系統 第17-23頁
·大腸桿菌中的Na~+/H~+逆向轉運蛋白 第17-20頁
·耐鹽菌和嗜鹽菌中的Na~+/H~+逆向轉運蛋白 第20-21頁
·嗜堿菌中的Na~+/H~+逆向轉運蛋白 第21頁
·其它類型微生物中的Na~+/H~+逆向轉運蛋白 第21-22頁
·NhaD Na~+/H~+逆向轉運蛋白 第22-23頁
·Na~+/H~+逆向轉運蛋白的應用前景 第23頁
·微生物Na~+/H~+逆向轉運蛋白亟待研究的問題 第23-24頁
·本研究的指導思想、目的和意義 第24頁
·本研究的技術路線 第24-26頁
2 新疆達坂鹽湖沉積土壤嗜鹽細菌的多樣性分析 第26-37頁
·材料和方法 第26-31頁
·樣品的采集和處理 第26頁
·主要儀器和實驗用品 第26頁
·菌株和載體 第26頁
·培養基 第26-27頁
·主要試劑 第27頁
·DNA提取試劑 第27頁
·電泳相關緩沖液 第27頁
·實驗方法 第27-31頁
·嗜鹽菌的定向富集 第27-28頁
·總基因組DNA的提取與純化 第28頁
·DNA濃度和純度的測定 第28頁
·PCR反應體系和條件 第28-29頁
·PCR產物的純化 第29頁
·連接 第29-30頁
·熱激感受態的制備 第30頁
·熱激轉化 第30頁
·菌落PCR 第30頁
·DNA序列測定 第30頁
·S rRNA的系統發育分析 第30-31頁
·核苷酸序列登錄號 第31頁
·結果與分析 第31-36頁
·總基因組DNA的提取 第31頁
·嗜鹽富集培養物16S rRNA基因多樣性及其系統發育分析 第31-36頁
·嗜鹽富集培養物16S rRNA基因系列擴增 第31-32頁
·嗜鹽富集培養物16S rRNA基因克隆文庫的構建與多樣性分析 第32-36頁
·討論 第36-37頁
3 微生物鈉離子輸出相關基因的克隆與功能研究 第37-55頁
·材料與方法 第37-43頁
·樣品的采集和處理 第37頁
·菌株、質粒和引物 第37-38頁
·主要儀器和實驗用品 第38頁
·培養基 第38頁
·堿法提取質粒所需主要試劑 第38頁
·實驗方法 第38-43頁
·總基因組DNA提取、純化及濃度測定 第38頁
·總基因組DNA的部分酶切 第38-39頁
·載體的酶切和去磷酸化 第39頁
·載體與總基因組DNA部分酶切片段的連接 第39-40頁
·連接產物純化 第40頁
·電轉化感受態細胞的制備 第40-41頁
·電激轉化 第41頁
·質粒的快速檢測 第41頁
·質粒提取 第41-42頁
·鈉離子輸出相關基因的亞克隆 第42-43頁
·基因序列的生物信息學分析 第43頁
·重組子在不同條件下的生長能力測試 第43頁
·結果和分析 第43-53頁
·總基因組DNA的部分酶切 第43-44頁
·陽性克隆子的篩選 第44頁
·重組質粒攜帶外源基因的序列分析 第44-51頁
·Na~+輸出相關基因的亞克隆 第51-52頁
·E.coli KNabc/pMDtetR-smrL的耐鹽性實驗 第52頁
·E.coli KNabc/pMDtetR-smrL對堿性pH的抗性 第52-53頁
·討論 第53-55頁
結論 第55-56頁
參考文獻 第56-65頁
縮略詞一覽表 第65-66頁
致謝 第66-67頁
項目資助與論文發表情況 第67頁
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