鏈霉菌噬菌體ΦC31位點特異性整合酶的結構與功能初步探討
論文摘要: ΦC31位（略）酶由于能介導攜帶有attB序列的目的基因位點特異性整合到哺乳動物細胞基因組中,因而該系統已成為基因操作及基因治療的強有（略）,該整合酶在哺乳動物細胞上介導整合的位點特異性和整合效率仍需進一步提高.而解析ΦC31位點特異性整合酶結構與功能關系是解決上述問題的基礎和關鍵.為此,本研究利用（略）ΦC31位點特異性整合酶結構進行預測,結合分子生物學技術對其結構與功能關系進行初步探討,其結果如下: 1、利用生物信息學對包含ΦC31位點特異性整合酶在內的絲氨酸位點特異性重組酶家族30個成員進行同源比對,結果顯示:aa1—120為催化結構域,其在整個家族里是保守的；aa291-359含有許多帶電殘基(22aa)和極性殘基(10aa),預測為蛋白多聚化相關區域,4個保守的Cys殘基位于aa353—405,該區域可（略）合相關區域,aa416—504為Leu富含區,包含了14個Leu,aa457—527預測為α螺旋結構. 2、依據ΦC31位點特異性整合酶結構預（略）T22b-ΦC311-528等八個截斷突變體質粒.這些質粒分別與ΦC31報告質粒共轉在體內進...
TheΦC31 site-specific integrase can promote gen（omitted）ration of plasmids carrying attB into native mammalian sequences. Consequently it has become a powerful to（omitted）e manipulation and gene therapy. However, the specificity and efficiency of integration in mammals need to be （omitted）proved. Analysis the relationship between structure and f（omitted） theΦC31 integrase is the basis and key for solving above problems. To this end, this stu（omitted）informatics to forecast the structure of theΦC3...
目錄:縮寫詞 第5-6頁
中文摘要 第6-7頁
英文摘要 第7-8頁
前言 第9-14頁
材料和方法 第14-30頁
·.材料與試劑 第14-20頁
·.方法 第20-30頁
結果 第30-44頁
·.ΦC31整合酶基因同源分析及結構預測 第30-32頁
·.ΦC31整合酶及其截斷突變體表達質粒構建 第32頁
·.ΦC31整合酶及其截斷體體內活性檢測 第32-34頁
·.ΦC31整合酶及其截斷體的表達與純化 第34-36頁
·.ΦC31整合酶及其截斷體蛋白DNA結合功能域的檢測 第36-40頁
·.ΦC31整合酶及其截斷體蛋白構象的遠紫外CD譜測定 第40-44頁
討論 第44-47頁
小結 第47-48頁
參考文獻 第48-52頁
綜述 第52-60頁
參考文獻 第57-60頁
致謝 第60-61頁
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