檢驗(yàn)技師考點(diǎn)：軟瓊脂培養(yǎng)法克隆

檢驗(yàn)技師考點(diǎn)：軟瓊脂培養(yǎng)法克隆

　　(1)軟瓊脂的配制：含有20%NCS(小牛血清)的2倍濃縮的RPMI1640.

　　①1%瓊脂水溶液：高壓滅菌，42℃預(yù)熱。

　　②0.5%瓊脂：由1份1%瓊脂加1份含20%小牛血清的2倍濃縮的RPMI1640配制而成。置42℃保溫。

　　(2)用上述0.5%瓊脂液(含有飼養(yǎng)細(xì)胞)15ml傾注于直徑為9cm的平皿中，在室溫中待凝固后作為基底層備用。

　　(3)按100/ml，500/ml或5000/ml等濃度配制需克隆的細(xì)胞懸液。

　　(4)1ml 0.5%瓊脂液(42℃預(yù)熱)在室溫中分別與1ml不同濃度的細(xì)胞懸液相混合。

　　(5)混勻后立傾注于瓊脂基底層上，在室溫中10min，使其凝固，孵育于37℃、5%CO2孵箱中。

　　(6)4～5天 后即可見針尖大小白色克隆，7～10天后，直接移種至含飼養(yǎng)細(xì)胞的24孔中進(jìn)行培養(yǎng)。

　　(7)檢測抗體，擴(kuò)大培養(yǎng)，必要是地再克隆化。

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