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膀胱上皮細(xì)胞特異性啟動(dòng)子UroplakinII的克隆及功能研究
畢業(yè)論文
| 全部作者： | 朱宏建 張智清 曾祥福 魏守順 徐春曉 黃國錦 郭應(yīng)祿 |
| 第1作者單位： | 武警總醫(yī)院 |
| 論文摘要： | 探討應(yīng)用UroplakinII (UPII) 啟動(dòng)子靶向性基因治療膀胱癌的可行性以及UPII啟動(dòng)子的調(diào)控機(jī)理。采用半定量RT-PCR方法，檢測了人類膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞株（BIU-87）和腎癌細(xì)胞株（GRC-1）、臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞株（EC）、肺癌細(xì)胞株（A549）、皮膚成纖維細(xì)胞株（Hs27）中UPII基因mRNA的表達(dá)情況。從正常人外周血中提取基因組DNA，以此DNA為模板，根據(jù)人基因組草圖序列設(shè)計(jì)引物，應(yīng)用多聚酶聯(lián)反應(yīng)技術(shù)（PCR）克隆人UPII結(jié)構(gòu)基因第1外顯子5’端上游1段序列（hUPII），同時(shí)構(gòu)建以綠色熒光蛋白（GFP）和熒光素激酶（Luc）為報(bào)告基因的重組質(zhì)粒，并構(gòu)建含不同長度hUPII突變體的重組質(zhì)粒，應(yīng)用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)，將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入BIU-87和GRC-1、EC、A549、Hs27，利用共聚焦顯微鏡、流式細(xì)胞儀和微板檢測儀觀察細(xì)胞表達(dá)綠色熒光蛋白和熒光素激酶的情況。結(jié)果: UPII基因的mRNA在BIU-87中有較高表達(dá)，而在其它組織細(xì)胞中表達(dá)極低。PCR克隆得到UPII結(jié)構(gòu)基因第1外顯子5’端上游1段2542bp的序列。重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后，BIU-87表達(dá)綠色熒光蛋白較多，10-20/HP，亮度較強(qiáng)，流式細(xì)胞儀測定表達(dá)量為10.1%。而GRC-1、EC細(xì)胞表達(dá)極少，0-5/HP，亮度暗，流式細(xì)胞儀測定表達(dá)量為0和1.8％。熒光素激酶在BIU-87中的表達(dá)量是其它組織細(xì)胞的2.2倍以上，存在顯著性差異（P<0.01）。hUPII-1、hUPII-2、hUPII-5在膀胱癌細(xì)胞中表達(dá)熒光素激酶的量明顯低于hUPII，但在其它組織細(xì)胞中的表達(dá)量僅略有減少，hUPII-3和hUPII-4在各種組織細(xì)胞中均不表達(dá)熒光素激酶。結(jié)論:本研究克隆的序列具有類似人UPII啟動(dòng)子的功能，UPII啟動(dòng)子上游973bp大小的序列決定了該啟動(dòng)子的組織特異性，下游325bp序列為該啟動(dòng)子的核心啟動(dòng)序列。 |
| 關(guān)鍵詞： | UroplakinII；啟動(dòng)子；膀胱癌 遠(yuǎn)程下載 論文(免費(fèi)PDF論文全文) |
| 發(fā)表日期： | 2006年10月29日 |
| 同行評議： | （暫時(shí)沒有）
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| 綜合評價(jià)： | （暫時(shí)沒有） |
| 修改稿： |
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