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淺析兒童三種肺炎支原體檢測法的臨床應(yīng)用
【摘要】 目的 探討肺炎支原體（MP）咽拭子快速液體培養(yǎng)法、咽拭子聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）法和血清MP被動凝集法（MP-Ab）等方法在兒童MP感染診斷治療過程中的敏感性。方法 采用3種MP檢測法對362例臨床擬診為呼吸道（非細(xì)菌性）感染的患兒的咽拭子和血清標(biāo)本進(jìn)行配對研究，每個患兒取咽拭子做快速培養(yǎng)和PCR，同時取血清做MP-Ab檢測，對3種方法的檢測結(jié)果與臨床診斷治療病例進(jìn)行回顧性分析。結(jié)果 回顧臨床病例診斷MP感染患兒152例。MP快速培養(yǎng)法檢出陽性78例，陽性率為51.3%，病程為（4.5±2.6）天；PCR法檢測出陽性103例，陽性率為67.8%，病程為（6.2±3.5）天；MP-Ab法檢測出陽性127例，陽性率83.5%，病程（8.1±4.5）天。結(jié)論 3種MP檢測法的敏感性與病程有相關(guān)性，臨床醫(yī)生應(yīng)根據(jù)患兒病程選取檢測方法，以提高陽性檢出率和敏感性。【關(guān)鍵詞】 肺炎支原體；快速培養(yǎng)法；咽拭子聚合酶鏈反應(yīng)；血清抗體；配對研究
肺炎支原體（mycoplasma pneumoniae,MP）是嬰幼兒、青少年急性呼吸道感染的主要病原體之一，臨床上大多數(shù)表現(xiàn)為呼吸道感染綜合征，其中約3%～10%可發(fā)展為支原體肺炎。但只根據(jù)臨床癥狀很難鑒別由MP或病毒、細(xì)菌等病原體引起的兒童呼吸道感染，給臨床治療帶來一定的困難。筆者采用3種MP檢測法對362例臨床擬診為呼吸道（非細(xì)菌性）感染患兒的咽拭子和血清標(biāo)本進(jìn)行配對研究，通過病例回顧來探索對支原體肺炎敏感的實(shí)驗(yàn)室診斷方法，以協(xié)助臨床準(zhǔn)確做出診治。
1 材料與方法
1.1 對象 收集湖南省兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科2006年1月1日～9月30日在呼吸免疫科就診住院患兒，有呼吸道感染癥狀，已經(jīng)初診為非細(xì)菌性感染的患兒362例作為研究對象，其中男175例，女187例；年齡為2個月～12歲，病程為1～90天。
1.2 方法 具體方法有：（1）用MP快速培養(yǎng)法、PCR法和MP-Ab法等3種MP檢測法對362例研究對象同時進(jìn)行檢測，記錄結(jié)果。（2）通過研究對象病歷回顧統(tǒng)計MP感染的例數(shù)，并按年齡、病程和3種MP檢測法結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。
1.3 臨床診斷MP感染的診斷標(biāo)準(zhǔn) 按文獻(xiàn)［1］、臨床癥狀、體征標(biāo)準(zhǔn)，包括回顧性診斷——即患兒經(jīng)紅霉素治療有效，經(jīng)青霉素、頭孢菌素治療無效者等；以及實(shí)驗(yàn)室檢查3種檢測法至少有一種陽性。病程計算方法：以病歷本記錄為準(zhǔn)，即在患兒開始有癥狀或體征時開始計算，到患兒來就診檢測時為止進(jìn)行計算。
1.4 MP快速培養(yǎng)法 支原體分離鑒別培養(yǎng)液由珠海市浪峰生物技術(shù)有限公司提供。清晨患兒未洗漱前用咽拭子取咽部分泌物，嚴(yán)格按說明書進(jìn)行，將咽拭子用無菌生理鹽水處理，接種到預(yù)溫的培養(yǎng)基中，37 ℃培養(yǎng)；培養(yǎng)基液體顏色由紫紅色變?yōu)椴菥G色或嫩綠色且清亮，并且在靜置時，瓶底有藍(lán)色顆粒或物質(zhì)沉淀為陽性，5天后培養(yǎng)基顏色不變或無藍(lán)色顆粒或物質(zhì)沉淀為陰性。PCR法：試劑由中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司提供。應(yīng)用PCR法檢測MP-DNA，嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行，以在紫外燈下出現(xiàn)180 bp擴(kuò)增帶結(jié)果判為陽性。每次試驗(yàn)均設(shè)陽性、陰性對照（陽性對照為MP質(zhì)粒，陰性對照為無菌生理鹽水），由專人進(jìn)行操作，質(zhì)量控制。MP-Ab法：試劑為日本瑞必歐株式會社MP-Ab檢測試劑SERODIA-MYCOⅡ凝集試驗(yàn)試劑盒，嚴(yán)格按試劑盒說明書操作，抽取患兒靜脈血3 ml，采用明膠顆粒被動凝集法，用血清檢測，結(jié)果以≥1∶40判斷為陽性。每次試驗(yàn)均設(shè)未致敏明膠顆粒、致敏明膠顆粒和陽性、陰性血清進(jìn)行測定。
1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，各年齡組與3種檢測方法結(jié)果比較用Spearman檢驗(yàn)；各年齡組間確診病例的陽性率比較用χ2檢驗(yàn)；3種檢測方法陽性結(jié)果與病程之間的比較用q檢驗(yàn)。
2 結(jié)果
2.1 陽性樣本 經(jīng)過回顧性診斷，在配對研究組362例研究對象中有152例符合MP感染的診斷標(biāo)準(zhǔn)，即有152例確診病例，其中肺炎45例，支氣管炎56例，上呼吸感染49例，支氣管哮喘2例。MP快速培養(yǎng)法檢測出78例陽性，PCR法檢測出103例陽性，MP-Ab法檢測出127例陽性。
2.2 結(jié)果分析 各確診病例的年齡分布，見表1。表1顯示兒童MP感染的年齡以3～4歲年齡段的病例最多，為46例，陽性率最高，為70.77%，與其余年齡組段比較P
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