- 相關推薦
蒺藜總黃酮提取工藝的研究
【摘要】 目的研究蒺藜總黃酮最佳提取工藝條件。方法采用正交實驗，以提取物中總黃酮的含量作為考察指標，優(yōu)選出最佳提取工藝。結果蒺藜總黃酮的最佳提取工藝條件為：提取時間1.5 h，提取溫度70～75℃，乙醇濃度70%，料液比1∶15(g/ml)，按照最佳提取工藝條件提取蒺藜全草中的總黃酮，含量可達7.152 mg/g。結論實驗設計的4因素中，提取時間對結果有極顯著的影響，提取溫度對結果有顯著的影響，乙醇濃度和料液比對結果影響不顯著。
【關鍵詞】 正交實驗; 蒺藜; 總黃酮; 紫外分光光度法
蒺藜Tribulus terrestrisl L.為蒺藜科(Zypophyllaceae) 一年生草本植物，廣布全國,習稱硬蒺藜。蒺藜全草含有皂苷類、黃酮類、氨基酸類及糖類等成分[1,2]，在心血管系統(tǒng)及強壯、抗衰老、增強性功能等方面表現(xiàn)較強的活性[3～5]。研究發(fā)現(xiàn)蒺藜中黃酮類的含量是皂苷含量的1.5倍左右，所含黃酮類化合物的苷元主要為槲皮素(Quercetin)、山萘酚(Kaempferol)及異鼠李素(Isorhamnetin)，且以槲皮素為母核的黃酮類成分含量最高[6]。蒺藜總黃酮提取工藝的研究尚未報道。本研究采用正交實驗設計，對影響蒺藜總黃酮提取的因素進行了研究，為獲得其最佳提取工藝條件提供實驗依據(jù)。
1 材料與儀器
1.1 供試植物蒺藜植物材料于2006?07采自寧夏鹽池縣，由寧夏大學生命學院植物教研室陳彥云教授鑒定為蒺藜科蒺藜屬蒺藜Tribulus terrestrisl L.。樣品采集后自然條件下陰干，用萬能粉碎機粉碎后過40目篩,儲存于陰暗、干燥處。
1.2 試劑蘆丁對照品(中國藥品生物制品檢定所);無水乙醇、NaNO2、Al(NO3)3、NaOH等試劑均為分析純。
1.3 儀器TU-1810DSPC型紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司)、旋轉蒸發(fā)儀(Buchi，瑞士)、SHZ-D循環(huán)水式真空泵(河南鄭州長城科工貿(mào)有限公司)、電熱恒溫水浴鍋HH.S11-2(北京長安科學儀器廠)。
2 方法
2.1 樣品提取精密稱取蒺藜粉末2 g，共計9份，參照文獻[7,8]，采用L9(34)正交設計(見表3～4)回流提取，固定提取次數(shù)為3次，抽濾，合并3次濾液，減壓蒸餾，回收乙醇，將提取液用無水乙醇定容于100 ml容量瓶中，搖勻，作為待測原溶液。各取上述待測原溶液5 ml，精密測定，置25 ml容量瓶中，加適量無水乙醇超聲溶解，稀釋至刻度，搖勻，靜置。取上清液5.0 ml置蒸發(fā)皿中，加入2.0 g聚酰胺粉吸附，于50℃水浴中揮去乙醇，然后轉入層析柱，先用25 ml石油醚洗脫，棄去洗脫液，再用無水乙醇洗脫，收集洗脫液(至鹽酸-鎂粉反應為陰性)，置25 ml容量瓶中，加無水乙醇至刻度，作為待測樣品溶液。
2.2 標準曲線的繪制精密稱取在120℃干燥至恒重的蘆丁標準品5.0 mg，用無水乙醇溶解，定容至100 ml，得濃度為50 μg/ml的標準液。分別精密吸取上述蘆丁標準液0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 ml置于10 ml容量瓶中，分別加5%亞硝酸鈉0.3 ml，放置6 min，再加10%硝酸鋁0.3 ml，放置6 min，加4%氫氧化鈉4 ml，加蒸餾水定容至刻度，搖勻，放置15 min后，在分光光度計上于510 nm處測定其吸光度，無水乙醇為空白參比。以吸收度A為縱坐標，濃度C為橫坐標，進行回歸分析，繪制回歸曲線。結果在0～5 μg/ml的范圍內(nèi)，濃度與吸光度有良好的線性關系。得出回歸方程：A=0.064 9C+0.001 2(C:μg/ml)，r=0.999 8。
2.3 樣品總黃酮含量測定精密吸取上述待測樣品溶液1.0 ml，分別置10 ml容量瓶中，按照“2.1.2”項下的方法，在510 nm下測定其吸光度A，按回歸方程計算出提取物中的總黃酮含量。
2.4 方法學考察
2.4.1 精密度考察精確稱取樣品粉末約2 g，按照待測樣品制備方法制備待測樣品溶液，準確吸取待測溶液1.0 ml,置于10 ml容量瓶中，加蒸餾水定容至10 ml，按“2.1.2”項下的方法，在510 nm下測定其吸光度A，5次測定的平均吸光度為0.061 3，RSD為0.67%，說明儀器的精密度良好。
2.4.2 穩(wěn)定性研究將上述溶液每隔10 min測定1次吸光度，5次測定的平均吸光度為0.066 2，RSD為1.21%(n=5)，表明待測樣品溶液在1 h內(nèi)穩(wěn)定。
2.4.3 重復性考察將上述溶液平行制備5份待測溶液，測定其吸光度，5次測定的總黃酮得率平均為6.3 mg/g，RSD為0.912%，說明方法的重復性好。
2.4.4 加樣回收率實驗分別精密吸取一定量的待測樣品溶液，按照上述方法測定其吸光度，計算回收率，平均回收率為100.73%，RSD為1.35%(見表1)，表明方法的回收率較好表1 加樣回收率實驗已知樣品量m/g加入對照品量m/g測定量m/g回收率(%)平均回收率(%)
3 結果
3.1 總黃酮提取方法的選擇浸泡法：取蒺藜粉末2 g，用15倍量的80%乙醇浸泡3次，2 h/次，抽濾，合并濾液回流法：取蒺藜粉末2 g，用15倍量的80%乙醇提取3次，2 h/次，抽濾，合并濾液。用以上兩種提取方法提取蒺藜總黃酮，依次測定其中總黃酮含量，得出回流法提取總黃酮的含量最高為6.612 mg/g，其次是浸泡法為5.263 mg/g。故選用回流法作為蒺藜總黃酮的提取方法，并通過下面正交實驗選擇最佳提取條件。
3.2 總黃酮提取的正交實驗在選擇回流作為提取方法的基礎上，擬定乙醇濃度、乙醇用量、提取溫度、提取時間作為考察因素，每個因素取3個水平，固定提取次數(shù)為3次，選用L9(34)正交表進行實驗。因素水平見表2，以提取物中總黃酮的得率為考察指標。結果見表3 對于總黃酮的提取，通過直觀分析，B因素影響不顯著，故以B因素作為誤差進行方差分析。結果見表4。根據(jù)表2和表3可以看出料液比、乙醇濃度對指標影響不顯著，提取溫度對指標有顯著性影響(P<0.05)，提取時間對指標有極顯著的影響 3.3 最佳提取條件的驗證按照上述確定的最佳條件，做5次平行實驗，得出總黃酮的含量比正交實驗中的任何一次實驗的含量都高，平均為7.152 mg/g，RSD為0.646%。這就進一步說明了正交實驗所得到的上述最佳條件為蒺藜總黃酮提取的較為理想的工藝表2 因素水平 表3 L9(34)正交實驗設計以及結果表4 方差分析
4 討論
基于回流提取方法，設計了較為合理的4因素3水平的正交實驗，選用了4種因素，研究對蒺藜中總黃酮提取的影響，實驗結果表明回流提取技術與傳統(tǒng)的浸泡相比較具有提取時間短、總黃酮得率高等優(yōu)點。根據(jù)實驗結果，最終確定提取工藝如下：取粉碎的蒺藜粉末適量，提取時間為1.5 h,乙醇濃度為70%,提取溫度為70～75℃,料液比為1∶15(g/ml)。
本研究選用正交實驗法優(yōu)化實驗條件，大大提高了蒺藜中總黃酮的提取效率。為蒺藜中黃酮類化合物的深入研究和為蒺藜藥用成分的進一步開發(fā)利用提供依據(jù)。
【參考文獻】
[1] 蔡利鋒，景鳳英，張建國，等.蒺藜化學成分的研究[J].藥學學報，1999, 34(10): 759.
[2] Dragomir Dinchev ,Bogdan Janda ,Liuba Evstatieva, et al. Distribution of steroidal saponins in Tribulus terrestris from diferent geographical regions[J].Phytochemistry, 2008, 69: 176.
[3] Oludotun A.Phillips ,Koyippalli T. Mathew, Mabayoje A.Oriowo. Antihypertensive and vasodilator effects of methanolic and aqueous extracts of Tribulus terrestris in rats[J].Journal of Ethnopharmacology , 2006,104: 351.
[4] 吳恩融，馮 建，立北齡，等.蒺藜皂甙抗衰老作用的實驗研究[J].中國藥學雜志，2000,35(2): 49.
[5] 張秀琴，徐 舉，金春花，等.蒺藜莖葉總皂甙的強壯作用[J].中成藥研究, 1987,17(9): 45.
[6] 師 勤，余伯陽，徐珞珊，等.反高效液相色譜法測定蒺藜類3種水解黃酮甙元的含量[J].藥物分析雜志，1999, 19(2): 75.
[7] 吳瓊詩.蒺藜全草中總黃酮的含量測定[J].廣東藥學院學報，1998, 14(4): 273.
[8] 孫敏耀，唐文照，盧 霞，等.分光光度法測定不同采收時間桑葉中總黃酮[J].中草藥, 2004, 35 (10): 1098.
【蒺藜總黃酮提取工藝的研究】相關文章：
關于滲漉法提取白芷總香豆素的工藝研究03-18
葫蘆茶根中總多酚提取富集工藝研究02-28
消痤飲提取工藝的研究03-29
研究菊花揮發(fā)油提取工藝03-18
研究復方癌痛平膠囊的提取工藝03-20
三仙壯骨膠囊提取工藝研究12-11
五味子果膠提取工藝研究11-14
正交設計法研究人參皂苷的最佳提取工藝03-18