HPLC法測(cè)定鎮(zhèn)咳寧顆粒中白花前胡甲素的含量
作者：汪保國(guó) 陳思東 周衛(wèi)平 原素 林雪穎【摘要】目的 建立復(fù)方制劑鎮(zhèn)咳寧顆粒中白花前胡甲素的含量測(cè)定方法。方法 采用高效液相色譜法采用phenomenexluna C18色譜柱，乙腈－水梯度洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)：321nm；柱溫：26℃。結(jié)果 白花前胡甲素在0.185ug～3.7ug范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r＝1；回收率99.62％，RSD為0.37％。結(jié)論 本測(cè)定方法簡(jiǎn)便可行、重復(fù)性好，可用于本制劑中的質(zhì)量控制。
【關(guān)鍵詞】鎮(zhèn)咳寧顆粒 白花前胡甲素 含量測(cè)定
鎮(zhèn)咳寧顆粒由前胡、紫菀、枳殼等多味中藥組成，具散風(fēng)清熱，化痰止咳之功。用于治療風(fēng)熱咳嗽，痰多，喘滿等癥狀。前胡為方中君藥，具有散風(fēng)清熱、降氣化痰等功效，其主要含有多種類(lèi)型的香豆素及其糖苷[1]，文獻(xiàn)報(bào)道白花前胡甲素是前胡藥材的代表性成分[2－4]。本方參照藥典［5］選用白花前胡甲素作為指標(biāo)成分，采用HPLC法測(cè)定白花前胡甲素的含量。
1 儀器與試藥
Aiglent 1100高效液相色譜儀(美國(guó)Aiglent公司，配有自動(dòng)進(jìn)樣器，柱溫箱，二級(jí)管陳列檢測(cè)器（DAD），四元（型號(hào)）泵，Aiglent-Chemstation 化學(xué)工作站。
鎮(zhèn)咳寧顆粒(批號(hào)：20080115、20080116、20080117)，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)新藥開(kāi)發(fā)研究中心提供；陰性對(duì)照樣品(自制) ；白花前胡甲素(供含量測(cè)定用，110753-200413)，由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。乙腈為色譜純，液相用水為超純水，其余試劑為分析純。
2 方法與結(jié)果
2.1 色譜條件
phenomenex luna C18(250mm×4.6mm,5um)為固定相；流動(dòng)相乙腈為流動(dòng)相A，水為流動(dòng)相B，按下表進(jìn)行梯度洗脫(表1)；流速：1mL／min；檢測(cè)波長(zhǎng)為321nm；柱溫：26℃；進(jìn)樣量：10uL。在該色譜條件下，白花前胡甲素峰可達(dá)基線分離，其它藥材成分對(duì)測(cè)定無(wú)干擾，結(jié)果見(jiàn)圖1。
表1 流動(dòng)相梯度洗脫時(shí)間表
白花前胡甲素對(duì)照品 復(fù)方供試品 缺前胡陰性對(duì)照
圖1 HPLC 色譜圖
2.2 對(duì)照品溶液的制備
精密稱取白花前胡甲素對(duì)照品適量，加甲醇溶解定容，制成濃度為0.185mg/mL的白花前胡甲素對(duì)照品溶液。
2.3 供試品溶液的制備
取樣品適量，研細(xì)，取細(xì)粉0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中,精密加入80%乙醇50ml,稱定重量,超聲處理（250W，40kHz）30分鐘, 放冷，再稱定重量,用80%乙醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,微孔濾膜濾過(guò), 取續(xù)濾液，作為供試品溶液。
2.4 線性關(guān)系考察
分別精密吸取對(duì)照品溶液1,2,4，8,l0,l2,16,20uL進(jìn)行色譜測(cè)定，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以對(duì)照品進(jìn)樣質(zhì)量(X，ug)對(duì)峰面積(Y，mAu．Sec)進(jìn)行線性回歸，求得回歸方程為：Y=1095.7X-1.4585，r=1，線性范圍0.185ug～3.7ug。（見(jiàn)表2）
表2 白花前胡甲素標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)定
2.5 精密度試驗(yàn)
精密吸取對(duì)照品溶液10uL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得峰面積積分值。白花前胡甲素平均峰面積為2031.53，RSD為1.28％。結(jié)果表明儀器精密度良好。
2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)
精密吸取同一供試品溶液10uL，于0，2，4，8，12 h進(jìn)樣測(cè)定。白花前胡甲素平均峰面積為1052.07，RSD為2.15％。表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。 2.7 重復(fù)性試驗(yàn)
取同一批次樣品(20080115)，按供試品溶液制備項(xiàng)下操作，平行制備6份，按上述色譜條件測(cè)定含量，結(jié)果白花前胡甲素平均含量為0.8012mg/ g，RSD為1.57%。結(jié)果表明本方法重復(fù)性良好。
2.8 加樣回收率試驗(yàn)
同一批次已知含量的鎮(zhèn)咳寧顆粒(20080115)適量，研細(xì)，取細(xì)粉約0.5g，精密稱定，精密加入一定量的白花前胡甲素對(duì)照品，按供試品溶液制備項(xiàng)下操作，重復(fù)操作6份，按上述色譜條件測(cè)定含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表3。結(jié)果表明該方法具有良好的回收率。
表3 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）
2.9 樣品測(cè)定
精密稱取鎮(zhèn)咳寧顆粒0.5g，按樣品制備方法制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液注入液相色譜儀中，測(cè)定含量。共測(cè)定3批，結(jié)果見(jiàn)表4。
表4 鎮(zhèn)咳寧顆粒含量測(cè)定結(jié)果（n＝3）
3 討論
3.1 供試品溶液制備方法曾考察提取方法(超聲、回流)、提取溶劑（50％乙醇、80％乙醇、甲醇）、提取溶媒量(50倍量、100倍量、200倍量) 、提取時(shí)間(15min、30min、45 min)。加熱回流與超聲處理樣品，兩者提取的白花前胡甲素含量相差不大，從操作簡(jiǎn)便角度考慮，確定提取方法為超聲提取；三種不同溶媒進(jìn)行提取，白花前胡甲素含量無(wú)差異。80%乙醇提取液更為澄清，容易濾過(guò)，因此提取溶媒選用80%乙醇；溶媒用量為100倍量和200倍量時(shí)提取效果差異不大，均高于50倍量時(shí)的提取效果，因此選擇溶媒用量為100倍量。超聲處理30min與45min結(jié)果近似，略高于超聲處理15min，因此選擇樣品超聲處理30min。
3.2 本實(shí)驗(yàn)曾采用乙腈-水、甲醇-水等系統(tǒng)的不同梯度作為流動(dòng)相，結(jié)果采用乙腈與水溶液梯度洗脫，分離效果好，重現(xiàn)性強(qiáng)。本測(cè)定方法可用于鎮(zhèn)咳寧顆粒的質(zhì)量控制。
參 考 文 獻(xiàn)
[1]南京中醫(yī)藥大學(xué).中藥大辭典[M].上�？萍汲霭嫔�,2006:3278.
[2]梁曉天主編.常用中藥基礎(chǔ)研究(第二卷)科學(xué)出版社,2004:378-380.
[3]關(guān)福蘭,金萬(wàn)寶,章新華等.白花前胡甲素對(duì)高鉀、乙酰膽堿收縮的離體家兔氣管平滑肌的作用[J].中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),1994,23(6):549—552.
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[5]中華人民共和國(guó)藥典(一部)[S].北京化學(xué)工業(yè)出版社.2005:152-153.
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